Лейкемоидные реакции. Ретикулоциты

Перед употреблением готовят в пробирке рабочий раствор бриллиантового крезилового синего из расчета на каплю 1% раствора оксалата калия 4 капли раствора краски бриллиантового крезилового синего. В краску добавляют 0,04 мл крови (две пипетки до метки 0,02). Смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 30 минут. Затем снова перемешивают и готовят тонкие мазки.

Метод 2 - окраска ретикулоцитов в пробирке азуром II.

В пробирку помещают 0,05 мл раствора краски азур II и 0,2 мл крови. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на 20 - 30 минут. Снова перемешивают и готовят тонкие мазки.

Метод 3 - окраска ретикулоцитов в пробирке азуром I.

В пробирку помещают 0,3 - 0,5 мл раствора краски азур I и 5 - 6 капель крови пипеткой от аппарата Панченкова. Пробирку закрывают резиновой пробкой, смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 1 - 1,5 часа (ретикулоциты окрашиваются лучше при экспозиции 1,5 - 3 часа). Перемешивают и готовят тонкие мазки.

В настоящее время в продаже имеются готовые красители для ретикулоцитов заводского изготовления. Окраска ретикулоцитов с их помощью производится согласно прилагаемой инструкции.

Окраска ретикулоцитов на стекле

Метод 1 - окраска метиленовым синим.

Для исследования ретикулоцитов пользуются и водным раствором метиленовой синьки 1:500.

На чистое, обезжиренное покровное стекло наносят каплю раствора метиленовой синьки, кладут его на высушенный нефиксированный препарат крови и сразу рассматривают иммерсией микроскопа.

Метод 2 - окрашивание толстой капли без фиксации, по Романовскому-Гимза.

В отличие от зрелых эритроцитов ретикулоциты при окрашивании не выщелачиваются; на фоне протоплазмы они имеют базофильно окрашенную синевато-фиолетовую сеточку.

Примечания:

. Большое значение для окрашивания препаратов крови имеет качество дистиллированной воды, она должна быть нейтральной. Для проверки в пробирку с 10 мл испытуемой воды опускают несколько крупинок гематоксилина. При нейтральной реакции вода через 1-5 минут окрашивается в светло-фиолетовый цвет. Если вода через 5 минут не становится фиолетовой, ее подщелачивают, прибавляя по каплям 1% раствор углекислого натрия до появления светло-фиолетового цвета (признак нейтральной реакции).

Появление фиолетового цвета воды раньше минуты указывает на щелочную реакцию; для получения нейтральной реакции воду подкисляют прибавлением по каплям 1% раствора уксусной кислоты. По количеству капель, необходимых для получения нейтрализации 10 ли воды, определяют количество щелочи или кислоты для нейтрализации данного количества воды.

Дистиллированную воду нейтрализуют также буферными смесями из 2 растворов:

) фосфорнокислый натрий двузамещенный (Na2HP04) - 17,838 г в 1 л воды;

) фосфорнокислый калий однозамещенный (КН2РО4) - 13,614 г в 1 л воды.

Для приготовления этих растворов необходимо пользоваться химически чистыми сухими реактивами. Растворы сохраняются в темном месте. Для большей сохранности следует прибавить в каждый раствор по кристаллику тимола.

Для нейтрализации дистиллированной воды прибавляют на 1 л воды по 5 мл каждого раствора.

. Все краски для окрашивания крови должны храниться в темном месте и не взбалтываться.

. Мазки смываются после окраски посредством пипетки либо слабой струей.

. Мазки должны сушиться на воздухе в вертикально-наклонном положении.

. В шкафу с красками для крови нельзя хранить щелочи, кислоты.

Методы подсчета количества ретикулоцитов:

I. Подсчет количества ретикулоцитов в мазке после окраски их специальными красителями. <http://www.clinlab.info/Reticulocytes_counting.shtml>

Данный метод является на практике наиболее используемым методом в связи с тем, что он простой, достаточно дешевый и не требует специального дорогостоящего оборудования, соответственно может применяться в любой клинико-диагностической лаборатории.

Принцип метода основан на выявлении зернисто-сетчатой субстанции ретикулоцитов при суправитальной окраске щелочными красками (насыщенный раствор бриллиантового крезилового синего в абсолютном спирте / раствор азура I /раствор азура II) с дальнейшим подсчетом их в мазке крови. Окраску ретикулоцитов проводят либо на стекле, либо в пробирке.

Перейти на страницу: 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

Биологические препараты

Биологические препараты - группа медицинских продуктов биологического происхождения, в том числе вакцины, препараты крови, аллергены, соматические клетки, ткани, рекомбинантные белки.  Смотреть...

Антибиотики

Большинство ученых подразумевает под антибиотиками не только антибактериальные вещества, образуемые микроорганизмами, но и соединения, обладающие антибактериальной активностью, выделенные из животных тканей и высших растений.  Смотреть...