Лейкемоидные реакции. Ретикулоциты

Ø оценка активности эритропоэза при состояниях, сопровождающихся гемолизом или кровопотерей;

Ø оценка способности костного мозга к регенерации после цитотоксической терапии и трансплантации костного мозга;

Ø оценка восстановления синтеза эритропоэтина после трансплантации почки;

Ø допинговый контроль у спортсменов (прием эритропоэтина);

Ø диагностика неэффективного гемопоэза или снижения продукции эритроцитов;

Ø дифференциальная диагностика анемий;

Ø детекция нарушения регенераторной способности костного мозга при дефиците железа, витаминов B12, B6, фолатов, меди и мониторинга соответствующей терапии;

Ø оценка реакции на терапию эритропоэтином, эритросупрессорами.

Подготовка к анализу

· Кровь на исследования рекомендуется сдавать натощак, пить можно только воду.

· После последнего приёма пищи должно пройти не менее 8 часов.

· Взятие крови на исследование необходимо проводить до начала приема лекарственных препаратов (если это возможно) или не ранее чем через 1-2 недели после их отмены.

· За день до взятия крови ограничить жирную и жареную пищу, не принимать алкоголь, исключить тяжёлые физические нагрузки.

Факторы, влияющие на результаты анализа

· Недостаточное перемешивание крови с антикоагулянтом или неправильный выбор антикоагулянта.

· Переливание крови незадолго до анализа.

· Гемолиз пробы крови.

· Приём различных лекарственных препаратов (кортикотропин, сульфаниламиды, противомалярийные препараты, леводопа, азатиоприн, нестероидные анальгетики, хлорамфеникол, метотрексат, фолиевая кислота, витамин В12, препараты железа, эритропоэтин).

Забор крови производят в пробирку с ЭДТА, можно перемещать, но не встряхивать.

Окраска

Особенность окраски ретикулоцитов <http://www.clinlab.info/Reticulocytes_counting.shtml> заключается в том, что они воспринимают краску только в момент, пока клетка, выведенная из кровеносного русла, еще жива. В это время и можно выявить нитчато-сетчатую субстанцию, окрасив ее. Такая окраска называется суправитальной (прижизненной). В высохшем, а тем более в зафиксированном мазке крови выявить ретикулоциты уже невозможно.

Подсчет ретикулоцитов в мазке после окраски их специальными красителями является на практике наиболее используемым методом подсчета количества ретикулоцитов. Это связано с тем, что метод простой, достаточно дешевый и не требует специального дорогостоящего оборудования, в связи с чем может применяться в любой клинико-диагностической лаборатории.

Принцип метода

Выявление зернисто-сетчатой субстанции ретикулоцитов при суправитальной окраске щелочными красками с дальнейшим подсчетом их в мазке крови.

Реактивы

Можно использовать один из следующих красителей:

1. Насыщенный раствор бриллиантового крезилового синего в абсолютном спирте (для приготовления абсолютного спирта надо выдержать 96% этанол в нескольких сменах прокаленного порошка медного купороса). На 100 мл абсолютного спирта берут 1,2 г краски.

2. Раствор азура I: азур I - 1 г, аммония оксалат - 0,4 г, натрия хлорид - 0,8 г, этиловый спирт 96% - 10 мл, дистиллированная вода - 90 мл. Раствор краски в закрытом флаконе помещают на 2 - 3 дня в термостат при 37° C и периодически энергично взбалтывают. Затем охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через бумажный фильтр. Раствор сохраняют в посуде из темного стекла. При появлении осадка краску следует снова профильтровать.

. Раствор азура II: азур II - 1 г, натрия цитрат - 5 г, натрия хлорид 0,4 г, дистиллированная вода - 45 мл. Раствор оставляют в термостат при 37° C на 2 суток, периодически помешивая. Для ускорения растворения краску можно прогреть на слабом огне в течение 15 - 20 мин, не доводя до кипения. Охлаждают до комнатной температуры и фильтруют. Хранят в посуде из темного стекла.

Специальное оборудование

Микроскоп.

Ход определения

Окраску ретикулоцитов проводят либо на стекле, либо в пробирке.

Окраска ретикулоцитов в пробирке

Окраска ретикулоцитов в пробирке отличается при использовании разных красителей.

Метод 1 - окраска ретикулоцитов в пробирке бриллиантовым крезиловым синим.

Перейти на страницу: 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

Биологические препараты

Биологические препараты - группа медицинских продуктов биологического происхождения, в том числе вакцины, препараты крови, аллергены, соматические клетки, ткани, рекомбинантные белки.  Смотреть...

Антибиотики

Большинство ученых подразумевает под антибиотиками не только антибактериальные вещества, образуемые микроорганизмами, но и соединения, обладающие антибактериальной активностью, выделенные из животных тканей и высших растений.  Смотреть...